产品详情
【产品简介】
Augene Tech 的鞘磷脂（SPH）ELISA检测试剂盒采用竞争抑制酶联免疫吸附分析法（Competitive ELISA），用于体外定量检测血清、血浆及其他生物液体中鞘磷脂（Sphingomyelin, SPH）的含量。鞘磷脂是细胞膜的重要组成成分，参与信号转导、细胞凋亡及动脉粥样硬化等多种生理病理过程，其水平检测对脂质代谢及相关疾病研究具有重要意义。
本试剂盒采用竞争抑制法。将鞘磷脂抗体包被于微孔板中，加入标准品或样品后，再加入生物素标记的鞘磷脂类似物。样品中的鞘磷脂与生物素标记的鞘磷脂类似物竞争结合有限的特异性抗体位点。温育洗涤后，加入HRP标记的亲和素，与生物素特异性结合。再次洗涤后加入TMB底物显色，TMB在过氧化物酶催化下呈蓝色，加酸终止后变为黄色。样品中鞘磷脂浓度越高，竞争结合抗体越多，显色越浅。用酶标仪在450 nm波长下测定吸光度（O.D.值），与标准曲线比较即可计算样品中鞘磷脂的浓度。
【产品特点】
1. 高灵敏度：最低检测限可达 1.85 ng/mL；
2. 宽检测范围：4.94–400 ng/mL 或 1.23–100 ng/mL（具体以实际批次COA为准）；
3. 高特异性：与其它相似物质无明显交叉反应；
4. 精密度好：批内CV < 10%，批间CV < 12%；
5. 回收率高：血清回收率 80–101%，血浆回收率 87–105%。
【储存条件】
- 未开封试剂盒：按各组分标签所示条件保存。标准品、检测试剂A、检测试剂B及96孔板应于 -20℃ 保存，其余组分于 4℃ 保存。
- 开封后试剂盒：剩余试剂仍按上述条件保存。未使用的板条应放回含干燥剂的铝箔袋中，密封后保存。
- 有效期：所有组分在有效期内稳定。开封后建议在 1个月内 使用完毕。
- 运输：冰袋运输。
【样本采集与处理】
血清
室温血液自然凝固 2小时（或4℃过夜），约 1000×g 离心20分钟，收集上清。立即检测或分装后于 -20℃ 或 -80℃ 保存，避免反复冻融。
血浆
使用 EDTA 或肝素 抗凝，采集后30分钟内于 2–8℃、1000×g 离心15分钟，收集血浆。立即检测或分装后于 -20℃ 或 -80℃ 保存。
其他样本
组织匀浆、细胞裂解液、细胞培养上清等也可用于检测，具体处理方式请根据样本类型优化。
【使用说明】
一、试剂准备
1. 洗涤缓冲液：将30×浓缩洗涤液用去离子水按 1:30 稀释后备用。
2. 检测试剂A工作液：临用前将检测试剂A用检测稀释液A按产品标签所示比例稀释（通常为1:100）。
3. 标准品梯度稀释：按说明书要求将标准品进行倍比稀释，制备标准曲线各浓度点。
二、操作步骤
1. 加样：分别设空白孔、标准品孔和待测样品孔。每孔加入标准品或样品 50 μL。
2. 加检测试剂A：每孔立即加入 50 μL 检测试剂A工作液，轻轻振荡混匀。
3. 温育：用封板膜封板，37℃ 温育 1小时。
4. 洗涤：弃去液体，每孔加满洗涤液，静置 30秒 后弃去，重复 3次，拍干。
5. 加检测试剂B：每孔加入 100 μL 检测试剂B工作液。
6. 温育：37℃ 温育 30分钟。
7. 洗涤：同步骤4，重复 5次。
8. 显色：每孔加入 90 μL TMB底物，37℃ 避光孵育 10–20分钟。
9. 终止：每孔加入 50 μL 终止液，终止反应（蓝色立即转为黄色）。
10. 测定：在 450 nm 波长处测定各孔吸光度（O.D.值），测定应在加终止液后 15分钟内 完成。
三、结果计算
以标准品浓度为横坐标，O.D.值为纵坐标，绘制标准曲线（推荐使用四参数Logistic曲线拟合或线性回归）。根据样品的O.D.值，在标准曲线上查得对应浓度。样品中鞘磷脂浓度与O.D.值呈负相关，即浓度越高，O.D.值越低。
【注意事项】
1. 仅限科研使用，不得用于临床诊断或治疗。
2. 试剂盒各组分应在有效期内使用，不同批号试剂请勿混用。
3. 操作过程中应严格避免交叉污染，使用带滤芯吸头加样。
4. TMB显色剂为光敏物质，操作时需避光。
5. 终止液含强酸，操作时请戴手套和护目镜，避免接触皮肤。
6. 洗涤过程中应确保每次拍干，残留洗涤液会影响检测精度。
7. 显色反应的温度和时间应严格控制，以确保结果的可比性。
8. 待测样品若超出标准曲线检测范围，应适当稀释后重新测定。
9. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。