产品详情
【产品简介】
Augene Tech 的 Western 快速转膜液（10×）是一种 10 倍浓缩的安全无毒害的用于 Western 湿法快速转膜的缓冲液。本产品为 10 倍浓缩溶液，使用前需用适当水和乙醇稀释至 1×。本产品不含有毒有害组分，无需使用剧毒的甲醇等试剂。使用本产品可在 10-40分钟内完成转膜过程，产热少，能将 PAGE 凝胶上的蛋白高效转移至 PVDF 膜或 NC 膜上。
【产品特点】
1. 快速高效：10-402分钟完成转膜，节省实验时间；
2. 安全无毒：不含甲醇等有毒有害组分，可用乙醇替代；
3. 转移效率高：对分子量跨度较大的蛋白有很好的转移效率，有效解决大小蛋白不能在同一张膜上同时转移的问题；
4. 兼容性强：兼容 Laemmli 胶、预制胶、Bis-Tris 胶等多种凝胶；
5. 产热少：转膜过程中产热小，内外槽均无须冰浴。
【储存条件】
- 保存： 4℃ 密封保存，有效期 12 个月。
- 运输：常温运输，避免高温及阳光直射。
- 注意事项：环境温度较低时可能会有结晶析出，可 37℃ 水浴加热助溶，待溶解完全后再行稀释使用。
【产品组成】
本品为 10× 浓缩液，含 Tris、甘氨酸及 SDS 等组分，不含甲醇。
【使用说明】
一、湿转法
1、1×工作液配制
（1）按比例配制 1× 工作液（以 1 L 为例）：取 100 mL 10× 转膜液，加入200mL 无水乙醇，补加超纯水至 1L（即 700 mL），混匀即可。
（2）充分混匀后即可使用。配制好的 1× 工作液建议现配现用。
> 注：乙醇浓度一般控制在 10%-20% 之间。如使用含水乙醇，请按照实际浓度计算加入量。
2、转膜前准备
（1） 将滤纸和海绵浸泡在 1× 快速转膜液中，完全浸湿，平衡 5 分钟。
（2） PVDF 膜使用前用无水甲醇润湿 30 秒以上，随后浸泡在 1× 快速转膜液中平衡 5 分钟。
（3） 将凝胶在超纯水中浸泡漂洗 1-2 分钟，去除胶表面的 SDS；随后将凝胶浸泡在 1× 快速转膜液中。
> 注意：水中漂洗时间不宜超过 2 分钟，否则大分子量蛋白可能不能完全转移。
3、湿转法操作步骤
（1） 按照以下顺序做好转印三明治结构：
> 负极（阴极）- 海绵 - 滤纸 - 电泳胶 - PVDF/NC膜 - 滤纸 - 海绵 - 正极（阳极）
（2）用滚轴彻底赶走凝胶与膜之间的气泡，适当补加 1× 快速转膜液保持湿润。
（3） 将三明治结构放于转移槽中，灌满 1× 快速转膜液。
（4） 恒流转膜推荐条件：375 mA，10-40分钟
> 注：建议使用外置冰浴。
二、半干转法
1、配制 1× 快速转膜液（同湿转法）
2、操作步骤
（1）将滤纸浸泡在 1× 快速转膜液中，完全浸湿。
（2）PVDF 膜使用前用无水甲醇润湿 30 秒，随后浸泡在 1× 快速转膜液中，完全浸湿，平衡 5 分钟。
（3）将凝胶在超纯水中浸泡漂洗 2 分钟，去除胶表面的 SDS；随后将凝胶浸泡在 1× 快速转膜液中。
注意：水中漂洗时间不宜超过 2 分钟，否则大分子量蛋白可能不能完全转移。
（4）按照以下顺序做好转印三明治结构：
负极（阴极）- 下层滤纸 - 凝胶 - 转印膜 - 上层滤纸 - 正极（阳极）
注意：半干转时，滤纸、胶、膜之间的大小一般为 下层滤纸 ≥ 膜 ≥ 胶 ≥ 上层滤纸。上下两层滤纸一定不能接触；滤纸、胶、膜之间千万不能有气泡。接触的滤纸和气泡会造成短路。
（5）半干转推荐使用恒压转移：25 V，10-20 分钟。
【常见问题及优化方案】
常见问题 | 可能原因 | 解决方法 |
转膜不充分 | 湿转转移槽铂金丝有盐沉积 | 彻底用超纯水清洗转移槽 |
转移膜，滤纸，凝胶没有在1×转移缓冲液中彻底平衡 | 转移膜，滤纸，凝胶要在1×快速转膜液中平衡5分钟，震荡平衡更好 | |
PVDF膜没有用甲醇预处理 | PVDF膜要用甲醇彻底润湿，然后在1×快速转膜缓冲液中平衡5分钟 | |
转膜时间不充分 | 适当延长转膜时间 | |
不连续的转膜 | 凝胶和膜之间有气泡 | 转膜三明治做好后，用滚轴把凝胶和膜之间的气泡赶走 |
PVDF膜没有用甲醇预处理 | PVDF膜要用甲醇润湿，然后在1×快速转膜缓冲液中平衡3-5分钟 | |
转膜设备不工作 | 电泳电源不配套 | 电泳电源要符合以下参数：300W，5-300V，0.01-3A |
【注意事项】
1. 仅限科研使用，不得用于临床诊断或治疗。
2. 使用后请及时拧紧瓶盖，密封保存，防止污染。
3. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。