产品详情
【产品简介】
Augene Tech 的抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色试剂盒，适用于破骨细胞的特异性鉴定，以及骨代谢相关研究中细胞标志酶的检测。酸性磷酸酶（ACP）广泛分布于各种组织细胞中，主要定位于溶酶体，是溶酶体的标志酶；其中抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）是破骨细胞的特征性标志酶，血液中的 TRAP 主要来源于破骨细胞，其活性水平可反映骨吸收功能状态。
本试剂盒采用萘酚 AS-BI 为底物，在含酒石酸的酸性条件下，TRAP 催化底物水解释放萘酚，萘酚与重氮盐偶联生成非水溶性的酒红色沉淀，定位于酶活性部位，从而实现 TRAP 的特异性显色和定位。本产品适用于新鲜血涂片、细胞涂片、冰冻切片及石蜡切片等多种样本类型，染色阳性细胞呈酒红色，背景清晰，结果可靠。
【储存条件】
- 保存：-20℃ 避光保存，有效期 3 个月。
- 运输：冷冻运输。
- 注意事项：试剂拆封后请尽快使用，TRAP 孵育液须现配现用。
【产品组成】
组分 | 规格（4×20mL） | 保存条件 |
TRAP 固定液 | 100 mL | 2-8℃，避光 |
AS-BI 染色液（B1） | 2×1 mL | -20℃，避光 |
GBC 染色液（B2） | 0.2 mL | -20℃，避光 |
TRAP 缓冲液（B3） | 18 mL | 室温，避光 |
苏木素染色液 | 20 mL | 2-8℃，避光 |
甲基绿染色液 | 20 mL | 室温，避光 |
注：临用前按 B1:B2:B3 = 1:0.1:9（约 10:1:90）比例混合，即为 TRAP 孵育液，即配即用。
【自备材料】
- 蒸馏水或去离子水
- 恒温箱（37℃）
- 载玻片、推玻片
- 光学显微镜
- 染缸、移液器
【使用说明】
1、血涂片及细胞涂片
（1）推片：取新鲜血液或细胞悬液约 3 μL 置于载玻片上，推玻片与载玻片保持 30° 角，匀速推成均匀薄层。
（2） 固定：自然晾干后，用 TRAP 固定液固定 30s–3 min（多数情况 30–60 秒即可）。
（3） 水洗：蒸馏水轻轻冲洗 30–60s。
（4） 孵育：稍微晾干（不宜过分干燥），放入新鲜配制的 TRAP 孵育液中，37℃ 温箱避光孵育 45–60min。
（5）水洗：孵育后水洗 1min。
（6） 复染（可选）：
- 苏木素染色液染色 5min；或
- 甲基绿染色液染色 2–3min。
（7）水洗、晾干、镜检。
2、冰冻切片
（1） 冰冻切片复温至 37℃，蒸馏水浸泡 1–2 min。
（2） 自然晾干，TRAP 固定液 2-8℃ 固定 1–3 min。
（3） 水洗，稍微晾干。
（4） 切片入 TRAP 孵育液，37℃ 温箱避光浸染 45–60 min，水洗。
（5）复染：苏木素染色 5–8 分钟 或甲基绿染色 2–3min。
（6） 水洗、晾干、镜检。
3、石蜡切片
（1） 石蜡切片脱蜡 5–10min，重复一次。
（2） 按冰冻切片步骤进行操作（石蜡切片无需固定）。
> 注：一般不建议用石蜡切片，如必须使用，组织包埋温度不宜高于 56℃，应使用熔点为 52–54℃ 的石蜡，浸蜡时间要短，否则酶活性会减弱或消失。
【染色结果】
- 阳性细胞（TRAP+） ：细胞质呈酒红色。
- 阴性细胞：细胞质无色或仅见复染颜色。
- 破骨细胞：呈强阳性酒红色染色。
【注意事项】
1. 仅限科研使用，不得用于临床诊断或治疗。
2. TRAP 孵育液易失效，必须现配现用，一周内有效。
3. 试剂配制的过程中，各个试剂的 pH 值必须准确，pH 不准会导致酶不能被有效激活。
4. 样本需新鲜，取材后应立即处理，否则会影响酶的活性。
5. 组织固定需在 4℃ 进行，时间不宜超过 24 小时，否则酶活性会减弱或消失。
6. 血涂片晾干后应及时染色，避免酶活性丧失。
7. 冰冻切片应减少在室温暴露的时间。
8. 孵育和复染过程均需避光操作。
9. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。