嘌呤霉素

【产品简介】

Augene Tech 的嘌呤霉素（Puromycin）是由白黑链霉菌（Streptomyces alboniger）发酵代谢产生的一种氨基糖苷类抗生素。其作用机制在于嘌呤霉素是氨酰-tRNA 分子 3‘ 末端的类似物，能够与核糖体的 A 位点结合并掺入到延伸的肽链中。嘌呤霉素同 A 位点结合后，不会参与随后的任何反应，从而导致蛋白质合成的提前终止并释放出 C-末端含有嘌呤霉素的不成熟多肽。本品常用于筛选和维持表达 pac 基因（嘌呤霉素 N-乙酰转移酶）的稳定转染细胞株。在某些特定情况下，亦可用于筛选转化携带 pac 基因质粒的大肠杆菌菌株。

【产品参数】

【产品特点】

高效筛选：适用于真核和原核细胞中稳定表达 pac 基因的细胞株筛选与维持；

作用快速：通常在 1-2 周内完成稳定细胞株的筛选；

适用范围广：可用于哺乳动物细胞、大肠杆菌等多种表达系统；

高纯度：经严格质量控制，纯度 ≥99%。

【储存条件】

保存：-20℃ 避光、干燥保存，有效期 4 年。

运输：冰袋或干冰运输，收货后立即 -20℃ 存放。

【产品组成】

本品为嘌呤霉素粉末（二盐酸盐形式），100 mg/瓶。

【使用说明】

一、储存液配制

1.取 25 mg 嘌呤霉素粉末，溶于 0.5 mL 无菌去离子水或 PBS 中，配制成 50 mg/mL 储存液；

2.充分溶解后，用 0.22 μm 滤膜过滤除菌（本品为非无菌包装，用于细胞实验需过滤除菌）；

3.按单次实验用量分装（如 20-50 μL/管），-20℃ 避光冻存，避免反复冻融。

注：也可溶于甲醇，配制成 10 mg/mL 的储存液。

二、最佳工作浓度的确定（杀灭曲线）

1.不同细胞对嘌呤霉素的敏感度差异较大，筛选前必须通过预实验确定最佳浓度。

Day 1：以 5-8×10⁴ cells/孔 的密度将细胞铺于 24 孔板，铺足够量的孔以进行后续梯度实验，37℃ 孵育过夜；

Day 2：准备含不同浓度嘌呤霉素的新鲜培养基（推荐梯度：0, 0.5, 1, 2, 3, 4, 5, 8, 10, 15 μg/mL，至少 5 个梯度），更换新鲜配制的筛选培养基，37℃ 孵育；

Day 4：更换新鲜的筛选培养基，并观察细胞存活率；

2.每 2-3 天更换新鲜的筛选培养基；

3.每日监测细胞，选择在 3-4 天内杀死所有细胞的最低浓度 作为最佳工作浓度。

参考浓度范围：

哺乳动物细胞：1-10 μg/mL（最佳浓度需通过杀灭曲线确定）

大肠杆菌（LB 琼脂） ：100-125 μg/mL

注：使用嘌呤霉素筛选大肠杆菌稳转株需要精确的 pH 值调节，且受宿主细胞本身的影响。

三、哺乳动物稳定转染细胞株的筛选

细胞转染含有 pac 基因的质粒 48-72 小时 后，将细胞（原样或稀释）置于含有最佳工作浓度嘌呤霉素的新鲜培养基中培养。

注意：当细胞处于分裂活跃期时，抗生素作用最明显。细胞过于密集，抗生素效力会明显下降。建议进行细胞分盘使其密度 不超过 25%。

每 2-3 天，移除和更换含有嘌呤霉素的新鲜筛选培养基。

筛选 7-10 天 后评估细胞形成的病灶（可能需要额外一周或更长时间，取决于宿主细胞系和转染效率）。

注意：嘌呤霉素的筛选至少需要 48 小时，有效浓度筛选周期一般在 3-10 天。

转移和放置 5-10 个抗性克隆 到一个 35 mm 培养皿中，用选择培养基继续培养 7 天，为后续实验做准备。

四、稳定细胞株的维持

筛选完成后，可使用以下方式之一维持培养：

方式A：使用与筛选相同的嘌呤霉素浓度持续维持；

方式B：降低至筛选浓度的 1/2 进行维持；

方式C：使用刚好能抑制敏感细胞生长但不足以致死的最低浓度。

【注意事项】

1.仅限科研使用，不得用于临床诊断、治疗等。

2.嘌呤霉素为有毒化合物，操作时请小心拿放，穿实验服并戴一次性手套，避免皮肤接触或吸入粉末。

3.本品为非无菌包装，若用于细胞实验，请提前做好预处理（0.22 μm 过滤除菌）。

4.一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。

5.不同细胞系对嘌呤霉素的敏感度差异较大，首次使用必须进行浓度梯度实验确定最佳工作浓度。

6.配制好的储存液若出现沉淀或变色，请勿使用。

7.废弃液及接触过的耗材需按生物危险品处理。