产品详情
【产品简介】
本试剂盒采用竞争法酶联免疫吸附测定（ELISA）技术，用于定量检测人血清、血浆及相关生物液体中25-羟维生素D3的含量。25-羟维生素D3是维生素D在体内的主要循环形式，其水平测定对于评估人体维生素D营养状况、钙磷代谢调节以及骨质疏松、佝偻病等相关疾病的研究具有重要价值。本试剂盒采用竞争法ELISA原理，用25-羟维生素D3抗原包被于酶标板微孔中，加入标准品或待测样品后，样品中的25-羟维生素D3与包被抗原竞争结合生物素标记的特异性抗体，随后通过HRP标记的亲和素催化TMB底物显色，颜色的深浅与样品中25-羟维生素D3的含量成反比，通过酶标仪在450 nm波长下测定吸光度，即可计算样品中目标物的浓度。
【产品特点】
1.高灵敏度：最低检测限可达 1.88 ng/mL；
2.宽检测范围：检测范围 3.13–200 ng/mL；
3.高特异性：与类似物无明显交叉反应；
4.高精密度：板内、板间变异系数均 < 10%；
5.回收率良好：回收率范围 80%–120%。
【试剂盒组成】
试剂盒组成 | 96孔配置 | 保存 |
说明书 | 1份 |
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封板膜 | 2片（96） |
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密封袋 | 1个 |
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酶标包被板 | 1×96 | -20℃ |
标准品(冻干粉) | 2支 (1支加150μl标准品稀释液溶解) | 2-8℃ |
标准品/样品稀释液 | 6ml×1瓶 | 2-8℃ |
浓缩生物素抗原 (冻干粉) | 1支 | -20℃ |
浓缩亲和素-HRP | 100μl×1支 | -20℃ |
生物素抗原稀释液 | 6ml×1瓶 | 2-8℃ |
亲和素-HRP稀释液 | 5.9ml×1瓶 | 2-8℃ |
显色剂A液 | 6ml×1瓶 | 2-8℃ |
显色剂B液 | 6ml×1瓶 | 2-8℃ |
终止液 (小心开启，瓶中有气压) | 6ml×1瓶 | 2-8℃ |
浓缩洗涤液 | 20ml(25×) | 2-8℃ |
【储存条件】
- 保存：2–8℃ 避光保存，有效期 6–12个月。
- 运输：冰袋或冷藏运输，收货后立即 2–8℃ 存放。
- 注意事项：
- 试剂盒从冷藏环境中取出后，应在室温平衡 30–60分钟 后方可使用。
- 未用完的板条应立即放回铝箔袋中，与干燥剂一起密封，2–8℃ 保存。
【样本采集与处理】
1. 血清：室温血液自然凝固 10–20分钟，离心 20 分钟左右（2000–3000 rpm），仔细收集上清。保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2. 血浆：应根据标本要求选择 EDT
一、试剂准备
1. 洗涤液配制：将 30× 浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水按 1:30 稀释后备用。
2. 标准品稀释：按说明书要求将标准品进行倍比稀释，制备标准曲线各浓度点。
二、操作步骤（供参考）
1. 加样：分别设空白孔（不加样品及酶标试剂）、标准品孔和待测样品孔。在标准品孔中准确加入不同浓度标准品 50 μL；在样品孔中先加样品稀释液 40 μL，再加待测样品 10 μL（样品最终稀释度为5倍），轻轻晃动混匀。
2. 温育：用封板膜封板后，置 37℃ 温育 30–60 分钟。
3. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干。每孔加满洗涤液，静置 30秒 后弃去，重复 5次，拍干。
4. 加酶：每孔加入酶标试剂 50–100 μL，空白孔除外。
5. 温育：同步骤2。
6. 洗涤：同步骤3。
7. 显色：每孔先加入显色剂 A液 50 μL，再加入显色剂 B液 50 μL，轻轻震荡混匀，37℃ 避光显色 10–15 分钟。
8. 终止：每孔加入终止液 50 μL，终止反应（此时蓝色立即转为黄色）。
9. 测定：以空白孔调零，在 450 nm 波长处依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后 15分钟 内完
三、结果计算
以标准品浓度为横坐标，OD值为纵坐标，绘制标准曲线（建议使用四参数Logistic曲线拟合或线性回归）。根据样品的OD值，在标准曲线上查得对应浓度，再乘以样品的稀释倍数，即为样品中25-羟维生素D3的实际浓度。
【注意事项】
1. 仅限科研使用，不得用于临床诊断或治疗。
2. 试剂盒各组分应在有效期内使用，不同批号试剂请勿混用。
3. 操作过程中应严格避免交叉污染，使用带滤芯吸头加样。
4. TMB显色剂为光敏物质，操作时需避光。
5. 终止液含强酸，操作时请戴手套和护目镜，避免接触皮肤。
6. 洗涤过程中应确保每次拍干，残留洗涤液会影响检测精度。
7. 显色反应的温度和时间应严格控制，以确保结果的可比性。
8. 待测样品若超出标准曲线检测范围，应适当稀释后重新测定。
9. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。