产品详情
【产品简介】
博莱霉素（Zeocin）是一种糖肽类抗生素，对细菌、真菌、植物和哺乳动物细胞均有广谱细胞毒性，常用于筛选和维持表达 Zeocin 抗性基因（sh ble）的稳定转染细胞株。本产品以 HEPES 配制，浓度 100 mg/mL，无菌过滤，即开即用。
【产品特点】
- 广谱高效，适用于原核、真核及哺乳动物细胞筛选
- 无菌即用，无需溶解或稀释前处理
- 筛选周期约 1–2 周
【储存条件】
-20℃ 避光保存，有效期至少 12 个月。避免反复冻融。
【产品组成】
博莱霉素溶液（100 mg/mL，溶于 HEPES，无菌过滤），5x1mL。
【使用说明】
1、最佳工作浓度确定
（1）细胞以约 25% 密度接种 24 孔板，培养过夜。
（2）更换含 0–1000 μg/mL 梯度浓度的培养基，每 2–4 天换液。
（3） 选择 1–2 周内杀死所有细胞的最低浓度作为最佳工作浓度。
参考浓度（哺乳动物细胞）：
多数细胞系 100–400 μg/mL（HeLa：50–100 μg/mL；MEFs：200–400 μg/mL）。
大肠杆菌筛选需使用低盐 LB 培养基（NaCl ≤ 5 g/L），推荐浓度 25–50 μg/mL；
酵母推荐 50–300 μg/mL。
2、稳定细胞株筛选
（1）细胞以 20%–30% 密度接种，培养过夜。
（2）转染或感染携带 Zeocin 抗性基因的载体，设未转染对照。
（3）48–72 h 后更换含最佳工作浓度博莱霉素的培养基。
（4）每 2–4 天换液，直至对照组细胞 100% 死亡（约 1–2 周）。
（5）存活细胞即为抗性细胞，可进一步筛选单克隆。
3、稳定细胞株维持
筛选完成后，可使用筛选浓度、半量浓度或刚好抑制敏感细胞的最低浓度维持培养。
【注意事项】
1. 仅限科研使用，不得用于临床诊断或治疗。
2. 博莱霉素对人体有害，操作时需穿戴防护装备，避免接触或吸入。
3. 细菌筛选须使用低盐 LB 培养基（NaCl ≤ 5 g/L），pH 7.5。
4. 建议分装冻存，避免反复冻融。
5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。