产品详情
【产品简介】
Augene Tech 的 Protein A/G Agarose 是用于分离、纯化抗体的通用型亲和层析介质。以高度交联的 4% 琼脂糖凝胶为基质，通过化学方法定向、高密度偶联了重组 Protein A 和 Protein G，可结合血清、腹水、培养上清液和其他抗体样品中几乎所有同种型和哺乳动物物种的 IgG，从而实现高效抗体纯化。本产品每 1 mL 总体积中 0.5 mL 为凝胶，使用前需将凝胶充分重悬混匀后吸取。
【产品特点】
1. 结合谱广：Protein A/G 融合蛋白，可对几乎任何哺乳动物物种进行多克隆 IgG 纯化；
2. 低非特异性：通过不带电荷的共价键固定蛋白 A/G，非特异性结合低；
3. 可重复使用：能够多次使用而不显著降低得率；
4. 操作灵活：适用于中压层析柱法及批式操作。
【储存条件】
- 保存：2–8℃ 保存，禁止冷冻，有效期 24 个月。
- 运输：冰袋运输，收货后立即 2–8℃ 存放。
- 注意事项：使用前请充分颠倒混匀，避免琼脂糖沉降导致浓度不均。
【产品组成】
Protein A/G Agarose 悬液，5 mL，保存于含 20% 乙醇的 1× PBS 中，琼脂糖含量约 50%（v/v）。
【使用说明】
一、推荐缓冲液（自备）
缓冲液 | 配方 |
结合/洗涤缓冲液 | 0.15 M NaCl,20 mM Na2HPO4,pH 7.0 |
洗脱缓冲液 | 0.1 M Glycine,pH 3.0 |
中和缓冲液 | 1 M Tris-HCl,pH 8.0 |
储存缓冲液 | 1× PBS,20% ethanol |
> 所有缓冲液建议用超纯水配制，配制后通过 0.45 μm 或 0.22 μm 滤膜过滤除菌。
二、中压层析柱法
1. 装柱：将 Protein A/G Agarose 装入合适的层析柱中，连接层析柱与色谱系统。
2. 柱平衡：用 5 倍柱体积的结合缓冲液清洗进行柱平衡，重复 2–3 次。
3. 上样：利用泵或样品环上样，收集流出液，可反复上样提高结合效率。
> 注：样品在上样前建议离心或用 0.22 μm 或 0.45 μm 滤膜过滤，减少杂质。
4. 洗杂：使用 10–20 倍柱体积的洗涤缓冲液冲洗柱子，去除非特异性吸附的杂蛋白，直至紫外吸收基线趋于平衡。
5. 洗脱：使用洗脱缓冲液洗脱，收集洗脱峰，立即用中和缓冲液中和至中性 pH。
6. 再生与保存：用洗脱缓冲液洗涤后，再用储存缓冲液平衡，保存于 2–8℃。
三、批式操作（小规模纯化/IP）
1. 取所需体积的 Protein A/G Agarose 悬液（如 100–200 μL），500×g 离心 1 分钟，弃上清。
2. 用 1 mL 结合缓冲液洗涤 2–3 次，每次 500×g 离心 1 分钟。
3. 加入含抗体的样品，4℃ 旋转孵育 1–2 小时或过夜。
4. 500×g 离心 1 分钟，收集上清（可用于检测未结合蛋白）。
5. 用结合缓冲液洗涤 3–5 次。
6. 加入洗脱缓冲液，室温孵育 5–10 分钟，500×g 离心收集洗脱液。
7. 洗脱液立即用中和缓冲液中和至中性。
【注意事项】
1. 仅限科研使用，不得用于临床诊断或治疗。
2. 禁止冷冻琼脂糖凝胶，冷冻会破坏微球结构。
3. 请勿高速离心或剧烈涡旋，避免琼脂糖破碎。
4. 使用前需充分混匀，取用后立即放回 2–8℃。
5. 洗脱时酸处理时间不宜过长，收集后立即中和，以免抗体失活。
6. 若长期保存，可加入 0.02% 叠氮化钠防腐，但后续用于 HRP 检测时需注意去除。
7. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。