产品详情
【产品简介】
Augene Tech RIPA裂解液-温和型是一款传统的细胞组织裂解液。本产品裂解得到的蛋白样品可以用于常规的PAGE、Western Blot、免疫沉淀（Immunol Precipitation，IP）、免疫共沉淀（Co-IP）、ELISA等操作，能够高效地提取细胞总蛋白，主要包括细胞质、细胞膜、细胞核、核基质、线粒体、高尔基体、内质网等蛋白。
【产品特点】
1.本产品可以高效提取多种蛋白，适用于多种类型的样品
2.含有多种抑制剂，可抑制蛋白降解，提高提取效果
3.适用于常规的PAGE、Western Blot、IP、Co-IP和ELISA等多种实验
【储存条件】
-25~-15℃存储，保质期12个月，避免反复冻融。
【产品组成】
裂解液（温和型） 100ml
【使用说明】
细胞样品：
a. 融解 RIPA 裂解液-温和型，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入 PMSF 或 AEBSF，使 PMSF 或 AEBSF 的最终浓度为 1 mM，或者根据实验需要加入适当的蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物。
b. 对于贴壁细胞：去除培养液，用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍（如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗）。 按照 6 孔板每孔加入 150 ~ 250 μL 裂解液的比例加入裂解液。用移液枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接 触动物细胞 1 ~ 2 s 后，细胞就会被裂解。植物细胞宜在冰上裂解 2 ~ 10 min。
c. 对于悬浮细胞：离心收集细胞，轻轻漩涡振荡或者弹击管底以把细胞尽量分散开。按照 6 孔板每孔细胞加入 150 ~ 250 μL 裂解液的比例加入裂解液。轻弹管底以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装 成 50 ~ 100 万细胞/管，然后再裂解。
d. 对于细菌或酵母：对于 1 mL 菌液或酵母液，离心去上清，如果有必要可以使用 PBS 洗涤一次，充分去除液体后， 轻轻漩涡振荡或者弹击管底以把细菌或酵母尽量弹散。加入 100 ~ 200 μL 裂解液，轻轻漩涡振荡或者弹击管底以混匀，冰上 裂解 2 ~ 10 min。如果希望获得更好的裂解效果，细菌和酵母可以分别使用溶菌酶和破壁酶（Lyticase）消化，然后再使用本 裂解液进行裂解。
注意：通常 6 孔板每孔细胞或者 1 mL 的菌液或酵母液中的细菌和酵母量加入 150 μL 裂解液已经足够，但如果细胞密 度非常高可以适当加大裂解液的用量到 200 μL 或 250 μL。每 100 万动物细胞用 100 μL 本产品裂解后获得的上清，其蛋白 浓度约为 2 ~ 4 mg/mL，不同细胞有所不同。
e. 充分裂解后，13500 ×g 离心 3 ~ 5 min，取上清，即可进行后续的 PAGE、Western Blot、IP 和 Co-IP 等操作
组织样品：
a. 把组织剪切成细小的碎片。
b. 溶解 RIPA 裂解液-温和型，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入 PMSF 或 AEBSF，使 PMSF 或 AEBSF 的最终浓度为 1 mM，或者根据实验需要加入适当的蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物。
c. 按照每 20 mg 组织加入 150 ~ 250 μL 裂解液的比例加入裂解液（如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果 需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。）。
d. 用玻璃匀浆器匀浆至充分裂解。也可以把组织样品冷冻后液氮研磨，研磨充分后加入裂解液进行裂解。
e. 充分裂解后，13500 ×g 离心 3 ~ 5 min，取上清，即可进行后续的 PAGE、Western Blot 和 IP 等操作。每 20 mg 冻存 的小鼠肝脏组织用 200 μL 本裂解液裂解后获得的上清，其蛋白浓度约为 15 ~ 25 mg/mL，不同状态的不同组织有所不同。
f. 如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈漩涡振荡使样品裂解充分。然后 13500 ×g 离心 3 ~ 5 min 取上清用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器或研磨设备，缺点是不如匀浆或研磨 裂解充分。
注意：RIPA 裂解液-温和型的裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为含有基因组 DNA 等的复合物。在不检测和基因组 DNA 结合特别紧密的蛋白的情况下，可以直接离心取上清用于后续实验；如果需要检测和 基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理打碎该透明胶状物，随后离心取上清用于后续实验。如果检测一些常见 的转录因子，例如 NF-kappaB、p53 等时，通常不必进行超声处理就可以检测到这些转录因子。
【注意事项】
1.本品仅供科研使用，不可用于临床诊断。
2.如产品出现异常，请勿使用。