qPCR荧光定量试剂盒，AGMB-36095

产品介绍

本产品是一款基于 SYBR Green I 染料法的高灵敏度、高特异性qPCR预混试剂盒。它将经过热启动修饰的高效Taq DNA聚合酶、优化的反应缓冲液、dNTPs以及SYBR Green I荧光染料预先混合成单一组分。

用户只需加入模板DNA、引物和水即可进行qPCR反应，极大地简化了操作步骤，提高了实验的重复性和通量。该试剂盒具有宽广的线性范围和卓越的扩增效率，专为基因表达分析（相对/绝对定量）、基因分型、病原体检测及高通量筛选等应用而优化，可兼容主流品牌的实时荧光定量PCR仪。

产品特点

1.  即用型预混液：所有qPCR核心组分均已预混，操作简便，只需加入模板和引物，大大减少移液步骤和操作误差。

2.  高灵敏度与宽广动态范围：可稳定检测从单拷贝到10^9个拷贝的广范围模板浓度，即使对低丰度目标基因也能实现精准定量。

3.  卓越的热启动酶：采用抗体法热启动Taq酶，有效抑制低温条件下的非特异性扩增和引物二聚体形成，确保反应的高特异性和高扩增效率（通常 > 90%）。

4.  强大的抑制物耐受性：优化的缓冲体系对常见于DNA模板制备中的抑制物（如肝素、离子型去污剂、血液残留物等）具有出色的耐受性，降低了对模板纯度的苛刻要求。

5.  快速循环程序：支持快速qPCR扩增程序，可在40分钟内完成40个循环，显著缩短实验时间。

6.  清晰的熔解曲线：使用高纯度的SYBR Green I染料，扩增结束后可获得单一、尖锐的熔解曲线峰，便于准确判断扩增产物的特异性。

使用方法（仅供参考）

实验前准备：

   请自备：模板DNA、上下游引物、RNase/DNase-free Water、qPCR专用八联管或96孔板、光学封板膜、冰盒、微量移液器及qPCR仪。

反应体系配置（以20μL体系为例）：

总体积：20 μL

轻柔吹打混匀，短暂离心将液体收集至管底。 为避免产生气泡影响荧光信号，请勿涡旋。

标准qPCR反应程序（以ABI 7500为例，可根据仪器和引物进行调整）：

注意事项

1.  无菌无污染操作：全程使用RNase/DNase-free的枪头和离心管，佩戴手套以避免核酸酶和外来DNA污染。

2.  引物设计：确保引物特异性好，避免形成引物二聚体或二级结构。引物跨内含子设计可有效排除基因组DNA干扰。

3.  模板质量与用量：模板DNA应无降解，A260/A280比值在1.8-2.0之间。过高或过低的模板量会影响扩增效率和Ct值准确性，建议进行模板梯度稀释实验以确定最佳用量。

4.  避免荧光淬灭：预混液中的SYBR Green I对光敏感，操作时应尽量避免长时间暴露于光下。建议在避光环境下分装和使用。

5.  优化实验：对于新的引物对，强烈建议进行退火温度梯度实验和引物浓度优化，以找到最佳反应条件。

6.  设置对照：每次实验必须设置无模板对照（NTC） 以检测试剂和环境中是否存在污染。

常见问题解答（FAQ）

Q1: 无模板对照（NTC）中出现扩增曲线怎么办？

A1: 这通常意味着污染。可能原因：1) 引物二聚体：优化引物浓度或提高退火温度。2) 试剂或环境污染：更换新批次水或Master Mix，并彻底清洁工作台。请确保NTC中除模板外，其他组分与样品孔完全一致。

Q2: 扩增效率不佳（<90% 或 >110%）可能是什么原因？

A2: 可能原因：1) 引物问题：设计不佳或降解，建议重新设计或合成。2) 模板问题：含有抑制物或降解。3) 反应条件不佳：退火温度不匹配，需进行温度优化。4) Master Mix分装不匀：使用前请充分混匀。

Q3: 熔解曲线出现多峰或非单一主峰意味着什么？

A3: 这表示存在非特异性扩增。可能原因：1) 引物特异性差。2) 退火温度过低。3) 模板量过多。请优化引物、提高退火温度或降低模板用量。

Q4: 重复孔之间Ct值差异大（SD > 0.5）怎么办？

A4: 这通常是由于操作误差导致。请检查：1) 移液精度：是否使用了校准过的移液器，并正确操作？2) 混匀是否充分？3) 反应板或管密封是否良好，有无液体蒸发？

Q5: 预混液是否可以反复冻融？

A5: 不建议。反复冻融会降低酶的活性并影响荧光染料的稳定性。建议收到产品后根据单次使用量进行小体积分装，并于-20°C避光保存。使用时，在冰上融化，轻柔混匀后使用。

产品声明
本产品仅限于科研，如需储存珍贵样本，请自行小规模尝试后大批量实验，产品售后仅限产品本身，无其他任何连带责任，请须知。

本产品仅供研究使用，不适用于临床诊断或治疗。