反转录试剂盒(All in one)，AGMB-36205
产品介绍
本产品是一款革命性的 All-in-One 反转录预混液试剂盒，专为快速、便捷、高特异性的cDNA合成而设计。其最大特点是将 gDNA去除步骤与反转录步骤无缝整合在同一管中，用户只需加入模板RNA和水即可启动反应。
试剂盒内含经过深度优化的 gDNA去除酶 和 高性能反转录酶，所有引物（随机引物与Oligo dT引物）、dNTPs及反应缓冲液均已预混在单一溶液中。该体系可在同一反应程序下，先于37°C进行gDNA的高效降解，随后在50°C下高效合成第一链cDNA，全程无需开盖或添加任何试剂，最大限度地减少了操作误差和样品污染风险，特别适用于高通量检测和快速基因表达分析。
产品特点
1. 极简操作流程：真正的All-in-One设计，只需加入RNA和RNase-free Water，一步完成gDNA去除与反转录反应，大大节省操作时间。
2. 高效去除gDNA：内置强大的gDNA去除酶，可有效降解模板中残留的基因组DNA，确保后续qPCR结果的准确性，避免假阳性。
3. 卓越的cDNA产量：采用高性能M-MLV反转录酶变体，具有更强的延伸能力和热稳定性，即使对于复杂二级结构的RNA模板或微量RNA，也能获得高产、全长的cDNA。
4. 广泛的RNA兼容性：预混的 Oligo dT 和随机引物组合，可适用于总RNA、mRNA乃至部分降解的RNA样本，确保对各种基因的高效反转录。
5. 出色的稳定性与兼容性：预混液经过严格测试，批间差小，稳定性高，其cDNA产物可直接用于qPCR、PCR、数字PCR等下游应用。
使用方法（仅供参考）
实验前准备：
请自备：模板RNA、RNase-free Water、RNase-free的PCR管、冰盒、PCR仪。
所有操作应在冰上进行，并使用RNase-free的枪头和离心管，以防止RNA降解。
反应体系配置（以20μL体系为例）：
组分 | 体积 | 备注 |
2× All-in-One RT Master Mix | 10 μL | 使用前请轻柔混匀并短暂离心 |
模板 RNA | X μL | 推荐使用量：10 pg - 1 μg Total RNA |
RNase-free Water | 补足至 20 μL | 无 |
总体积：20 μL
轻柔吹打混匀，短暂离心将液体积于管底。
反应程序（在PCR仪上设置）：
1. gDNA去除阶段：37°C for 5 minutes
2. 反转录反应阶段：50°C for 15 minutes
3. 酶失活阶段：85°C for 5 seconds
4. 保温：4°C ∞
反应后处理：
反应结束后，可将得到的cDNA溶液置于冰上直接用于后续PCR实验，或于-20°C保存备用。
注意事项
1. RNA样本质量：RNA的完整性与纯度是实验成功的关键。请确保RNA样本无降解，并且A260/A280比值在1.8-2.1之间。
2. 防止RNase污染：实验过程中务必使用RNase-free的实验器材和耗材，避免RNase污染导致RNA降解。
3. 避免反复冻融：试剂盒组分建议在-20°C条件下保存。2× All-in-One RT Master Mix 在使用前应置于冰上融化，溶解后请轻柔涡旋混匀，并短暂离心。为避免反复冻融影响活性，建议根据使用频率将预混液进行分装。
4. 体系配置：请严格按照推荐的反应体系配置，过多或过少的RNA模板量可能会影响反转录效率。
5. 无基因组DNA确认：对于关键基因的表达分析，强烈建议设置No-RT Control（即在配置反应体系时不加2× All-in-One RT Master Mix，用等体积水代替，并以该产物作为模板进行qPCR），以验证gDNA去除效果。
常见问题解答（FAQ）
Q1: 为什么我的No-RT Control在qPCR中仍有扩增信号？
A1: 可能原因有：1) RNA样本中gDNA残留量过高，超出了试剂的去除能力。建议对模板RNA进行梯度稀释或使用柱式法纯化RNA。2) qPCR引物设计不当，跨内含子剪切位点可以有效避免gDNA扩增，请检查引物特异性。
Q2: 推荐的RNA投入量是多少？
A2: 我们推荐使用10 pg - 1 μg的总RNA。对于高丰度基因，10-100 ng即可；对于低丰度基因，建议使用500 ng - 1 μg。最佳用量可通过预实验确定。
Q3: 反应产物可以保存多久？
A3: 得到的cDNA产物可在-20°C稳定保存至少1个月，在-80°C可长期保存。但应避免反复冻融，建议分装保存。
Q4: 能否只使用其中一种引物？
A4: 本试剂盒预混了Oligo dT和随机引物的优化混合物，以兼顾mRNA的3‘端完整转录和缺乏PolyA尾的RNA（如rRNA、病毒RNA）的转录。不建议用户自行更改引物系统。
Q5: 预混液出现沉淀是否影响使用？
A5: 由于试剂浓度较高，在低温储存和运输过程中可能出现沉淀，这属于正常现象。使用前请于室温或37°C水浴中完全溶解，并轻柔涡旋混匀，待沉淀完全消失且溶液澄清后使用，性能不受影响。
产品声明
本产品仅限于科研，如需储存珍贵样本，请自行小规模尝试后大批量实验，产品售后仅限产品本身，无其他任何连带责任，请须知。
本产品仅供研究使用，不适用于临床诊断或治疗。
